W chemii rozcieńczanie to proces zmniejszania stężenia substancji w roztworze. Rozcieńczenie łańcuchowe to powtarzane rozcieńczanie roztworu w celu szybkiego zwiększenia współczynnika rozcieńczenia. Ta procedura jest zwykle wykonywana w eksperymentach, które wymagają bardzo rozcieńczonych roztworów z dużą dokładnością. Na przykład eksperymenty obejmujące krzywe stężenia w skali logarytmicznej lub eksperymenty mające na celu określenie gęstości bakterii. Rozcieńczenia łańcuchowe są szeroko stosowane w eksperymentach naukowych, takich jak biochemia, mikrobiologia, farmakologia i fizyka.
Krok
Metoda 1 z 2: Wykonywanie podstawowego rozcieńczenia
Krok 1. Określ odpowiedni roztwór rozcieńczalnika
Bardzo ważne jest określenie płynu, który ma być użyty do rozcieńczenia. Wiele roztworów jest rozpuszczalnych w wodzie destylowanej, ale nie zawsze tak jest. Jeśli rozcieńczasz bakterie lub inne komórki, zrób to na pożywce hodowlanej. Wybrany płyn będzie używany do wszystkich rozcieńczeń łańcuchowych.
W razie wątpliwości, którego rozcieńczalnika użyć, poszukaj pomocy lub zajrzyj do Internetu. Poszukaj przykładów od innych, którzy wykonali podobne rozcieńczenia łańcucha
Krok 2. Przygotuj kilka probówek zawierających 9 mL rozcieńczalnika
Probówki są używane do pustych rozcieńczeń. Najpierw włóż nierozcieńczoną próbkę do pierwszej probówki, a następnie rozcieńcz kolejno do kolejnych probówek.
- Oznacz wszystkie używane probówki przed rozpoczęciem rozcieńczania, aby nie pomylić się po uruchomieniu eksperymentu.
- Każda probówka zostanie wypełniona 10 rozcieńczeniami, zaczynając od probówki, której substancja nie została rozcieńczona. Rozcieńczenie w pierwszej probówce wynosi 1:10, następnie 1:100 w drugiej probówce, 1:1000 w trzeciej i tak dalej. Określ ilość rozcieńczenia, które należy przeprowadzić wcześniej, aby nie marnować roztworu rozcieńczalnika.
Krok 3. Przygotuj probówkę zawierającą co najmniej 2 ml nierozcieńczonego roztworu
Minimalna ilość roztworu do rozcieńczenia wymagana do wykonania tego rozcieńczenia łańcuchowego wynosi 1 ml. Jeśli użyjesz tylko 1 ml, nie pozostanie nierozcieńczony roztwór. Oznacz BLM dla nierozcieńczonych roztworów.
Dokładnie wymieszać roztwór przed rozpoczęciem jakiegokolwiek rozcieńczania
Krok 4. Wykonaj pierwsze rozcieńczenie
Pobrać 1 mL nierozcieńczonego roztworu z probówki BLM za pomocą pipety i umieścić w probówce oznaczonej 1:10 zawierającej 9 mL rozcieńczalnika, a następnie dokładnie wymieszać. Jest teraz 1 ml nierozcieńczonego roztworu w 9 ml rozcieńczalnika. W ten sposób roztwór został rozcieńczony o współczynnik rozcieńczenia 10.
Krok 5. Wykonaj drugie rozcieńczenie
W przypadku drugiego rozcieńczenia pobrać 1 ml roztworu z probówki 1:10, a następnie włożyć do probówki 1:100, która również zawiera 9 ml rozcieńczalnika. Upewnij się, że roztwór w probówce 1:10 jest całkowicie wymieszany przed dodaniem go do następnej probówki. Ponownie upewnij się, że rozcieńczenie w probówce 1:100 jest całkowicie wymieszane. Roztwór z probówki 1:10 rozcieńczono 10-krotnie w probówce 1:100.
Krok 6. Kontynuuj tę procedurę, aby wykonać dłuższe rozcieńczenia łańcucha
Proces ten można powtarzać tyle razy, ile jest to konieczne do uzyskania pożądanego stężenia roztworu. W eksperymentach z wykorzystaniem krzywych stężeń można wykonać rozcieńczenia łańcuchowe, aby wytworzyć szereg roztworów o rozcieńczeniach 1, 1:10, 1:100, 1:1000.
Metoda 2 z 2: Obliczanie współczynnika rozcieńczenia i stężenia końcowego
Krok 1. Oblicz stosunek ostatniego rozcieńczenia w rozcieńczeniu łańcuchowym
Całkowity stosunek rozcieńczenia można określić, mnożąc współczynnik rozcieńczenia z każdego etapu do etapu końcowego. Ilustracja matematyczna przedstawia wzór DT = D1 x D2 x D3 x … x D , DT jest całkowitym współczynnikiem rozcieńczenia i D to stosunek rozcieńczalnika.
- Na przykład, powiedzmy, że robisz rozcieńczenie 1:10 4 razy. Wstaw czynnik rozcieńczający do wzoru: DT = 10 x 10 x 10 x 10 = 10 000
- Współczynnik rozcieńczalnika w czwartej probówce w tym rozcieńczeniu łańcucha wynosi 1:10 000. Stężenie substancji po rozcieńczeniu jest 10 000 razy niższe niż przed rozcieńczeniem.
Krok 2. Określ stężenie roztworu po rozcieńczeniu
Aby określić końcowe stężenie roztworu po rozcieńczeniu łańcucha, musisz znać jego początkowe stężenie. Wzór to Ckończyć się = Cpoczątek/D, Ckończyć się to końcowe stężenie rozcieńczonego roztworu, Cpoczątek jest początkowym stężeniem pierwotnego roztworu, a D jest ustalonym stosunkiem rozcieńczenia.
- Na przykład: Jeśli zaczniesz od roztworu komórek, którego stężenie wynosi 1 000 000 komórek na ml, a stosunek rozcieńczenia wynosi 1000, jakie jest końcowe stężenie rozcieńczonej próbki?
-
Korzystając ze wzoru:
- Ckończyć się = Cpoczątek/D
- Ckończyć się = 1.000.000/1.000
- Ckończyć się = 1000 komórek na ml.
Krok 3. Upewnij się, że wszystkie jednostki są takie same
Wykonując jakiekolwiek obliczenia, upewnij się, że jednostki są zawsze takie same na końcu obliczenia. Jeśli początkową jednostką są komórki na ml, upewnij się, że jednostki pozostają takie same na końcu obliczeń. Jeżeli stężenie początkowe wynosi części na milion (bpd), to stężenie końcowe musi również być wyrażone w jednostkach bpj.
